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貴州吉?jiǎng)?chuàng)生物技術(shù)有限公司免疫組化實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1 細(xì)胞培養(yǎng)：

1)      傳心肌細(xì)胞至24孔板：將細(xì)胞舊培養(yǎng)基抽出，加入2mlPBS洗2次，加入400μl  0.25% 膠原酶，37℃消化2min。

2)      加入完全培養(yǎng)基終止消化，吹打混勻，加入足量培養(yǎng)基，以500μl /孔向24孔板中加入細(xì)胞懸液（共傳6個(gè)孔），37℃繼續(xù)培養(yǎng) 。

2  實(shí)驗(yàn)操作：

1觀察：24孔板中細(xì)胞生長(zhǎng)正常，培養(yǎng)基透明澄清，未見明顯微生物活動(dòng)，覆蓋約50%

2 操作：細(xì)胞鑒定---TNNI3（Assay biotech  B0588 ）免疫組化檢測(cè)

1） 將24孔板舊培養(yǎng)基抽出，用PBS洗3遍，每次300μl。

2） 每孔加入300μl  4%多聚甲醛固定20min。

3） 棄掉多聚甲醛，PBS洗3遍，每次300μl，浸泡3min。

4） 使用康為世紀(jì)免疫組化染色試劑盒，貨號(hào)CW2035S。（說明書另附）

5） 試劑一，常溫孵育10min。

6）去掉試劑一加入PBS 洗三遍，加試劑二, 室溫孵育10min 甩干。

7）加入1:100的TNNI3抗體（PBS稀釋）4℃孵育過夜。

8） 抽掉抗體， PBS洗3遍，每次3min，

9） 加入試劑3 室溫孵育10min。

10） PBS洗3遍，每次3min。

11） 加入試劑四,室溫孵育10min。

12） PBS洗3遍，每次3min。

13）配置DAB染色劑，取1ml試劑B至1.5ml離心管中，滴加試劑A   2滴，漩渦打勻。

14） 在每孔加入顯色劑300μl，顯微鏡下觀察（顯紅色）。

15）結(jié)果如圖。

1 培養(yǎng)：

1)      傳心肌細(xì)胞至24孔板：將細(xì)胞舊培養(yǎng)基抽出，加入2mlPBS洗2次，加入400μl  0.25% 膠原酶，37℃消化2min。

2)      加入完全培養(yǎng)基終止消化，吹打混勻，加入足量培養(yǎng)基，以500ul/孔向24孔板中加入細(xì)胞懸液（共傳6個(gè)孔），37℃繼續(xù)培養(yǎng) 。

2 實(shí)驗(yàn)操作：

1觀察：24孔板中細(xì)胞生長(zhǎng)正常，培養(yǎng)基透明澄清，未見明顯微生物活動(dòng)，覆蓋約50%

2 操作：細(xì)胞鑒定---α-Actin（Proteintech  23660-1-AP）免疫組化檢測(cè)

1） 將24孔板舊培養(yǎng)基抽出，用PBS洗3遍，每次300ul。

2） 每孔加入300μl  4%多聚甲醛固定20min。

3） 棄掉多聚甲醛，PBS洗3遍，每次300μl，浸泡3min。

4） 使用康為世紀(jì)免疫組化染色試劑盒，貨號(hào)CW2035S。（說明書另附）

5） 試劑一,常溫孵育10min。

6）去掉試劑一加入PBS 洗三遍，加試劑二, 室溫孵育10min 甩干。

7）加入1:100的TNNI3抗體（PBS稀釋）4℃孵育過夜。

8） 抽掉抗體， PBS洗3遍，每次3min，

9） 加入試劑3 室溫孵育10min。

10） PBS洗3遍，每次3min。

11） 加入試劑四,室溫孵育10min。

12） PBS洗3遍，每次3min。

13）配置DAB染色劑，取1ml試劑B至1.5ml離心管中，滴加試劑A   2滴，漩渦打勻。

14） 在每孔加入顯色劑300ul，顯微鏡下觀察（顯紅色）。

15）結(jié)果如圖。

結(jié)果該細(xì)胞大部分被染成紅色，說明該細(xì)胞中含有α-Actin抗體。